研究以铕聚苯乙烯荧光微球为载体与伏马毒素B1单克隆抗体进行共价偶联，基于抗原抗体的特异性结合，建立了粮谷物中伏马毒素B1的时间分辨免疫层析方法。通过对偶联物制备工艺、铺垫比例、包被浓度、样本前处理进行优化，得到最优反应条件：活化缓冲液0.05mol/LMESpH5.0，偶联缓冲液0.01mol/LBBpH8.0，EDC用量120μg，抗体用量80μg，偶联物稀释比例30%，包被浓度C线0.5mg/mL、T线0.6mg/mL，提取液50%甲醇水。该方法的检测线性范围为40~1200ng/g。玉米面、玉米糁、小麦三种样本的回收率在82.30%~102.60%，CV系数均在15%以下。同时与ELISA试剂盒及高效液相色谱法检测结果具有较好的一致性。方法特异性好，与结果类似物FB2及其他常见真菌毒素无交叉反应。方法稳定性好，成品试纸条置37℃放置14d基本稳定。该试纸条准确度高，重复性、特异性及稳定性好，配套荧光免疫分析仪可用于现场谷物中伏马毒素定量检测。